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Western blot 實驗技術服務

作者:技術部 發布日期:2017-06-02 點擊量:1326

一、服務內容

1、從動物細胞、人或動物組織、細菌、植物等樣品中提取蛋白,重組蛋白、血清、培養上清等樣品

2、對樣品中蛋白進行半定量分析

3、Western blot檢測

(1) 電泳:聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)分離蛋白樣品

(2) 濕法轉印(BLOTING:Tank Transfer)

(3) 雜交:用抗體鑒定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)

(4) 化學發光檢測(ECL),膠片曝光,TotalLab Quant軟件讀取IOD值(可選)

4、預實驗及正式實驗服務:幫助客戶設計樣品上樣順序以符合論文發表要求

5、免費進行蛋白內參檢測(所有內參抗體均免費提供)

二、樣品要求

1、細胞>1×107;組織>30mg;細菌濕重>1mg;植物>100mg;血清>50ul;等

2、樣品蛋白濃度>1mg/ml,蛋白量>200ug/樣品

三、收費標準

服務項目

收費標準

實驗周期

    預實驗

蛋白抽提(總蛋白)

60/樣本

1

胞漿、胞核蛋白分開抽提

100/樣本

1

蛋白定量

25/樣本

1

Western  Blot(含胞漿蛋白內參)

1000/目的蛋白

2

         正式實驗

蛋白抽提(總蛋白)

60/樣本

1

蛋白定量

25/樣本

1

Western  Blot(含胞漿蛋白內參)

1000/目的蛋白

2

         IOD讀取

TotalLab  Quant讀取條帶IOD值及計算

200/條帶

2

四、客戶提供材料

1、新鮮或正確保存的樣品(按照我們的要求提供)

2、目的蛋白一抗:我們可以給客戶免費提供抗體查找服務

3、陽性對照樣品(盡量提供)

4、相關文獻(可選)

五、提交給客戶結果

1、預實驗曝光結果(膠片及掃描圖),預實驗采取3個一抗稀釋度

2、正式實驗曝光結果(膠片及掃描圖)

3、完整實驗報告

4、IOD值分析報告(可選)

六、服務項目說明

客戶要求加可曝光marker的,需事先說明,并按照可曝光項目收費。

1、提供的蛋白量與目的待檢測的蛋白數量有關,蛋白數量增加相應的樣品量也要增加。

2、胞漿、胞核蛋白抽提樣品來源為:哺乳動物細胞、動物組織。如果1個樣品分別提取胞漿、胞核蛋白后,蛋白定量時以2個樣品計算。

3、每張膜樣品數量為1-8個,不足8個以8個收取。9-16個樣品為2張膜,17-24個樣品為3張膜;以此類推。

舉例:7個樣品,1個目的蛋白,算1張膜;有9個樣品,1個目的蛋白,算2張膜

          7個樣品,2個目的蛋白,算2張膜,有9個樣品,2個目的蛋白,算4張膜

以上為一般算法。如果客戶樣品數量需要按照組別等來進行上樣時需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數。

4、選擇部分樣品進行預實驗,參考目的蛋白一抗說明書進行3個稀釋度的預實驗。

5、向客戶反饋預實驗結果,等待客戶確認預實驗結果后確定是否進行正式實驗。

6、請您提供質量保證的一抗(或委托我公司代購)。抗體的使用量通過預實驗后進行確認,一般不回收使用一抗。

7、如果需要對膜上目的蛋白進行抗體剝離(洗脫或者 stripping)的,請提前說明

8、建議提供目的蛋白陽性表達樣品(純蛋白、有陽性表達的細胞或組織、商品化的陽性對照產品等)作為陽性對照。

9、免費內參檢測為:beta-actin,beta-tubulin,GAPDH,Histone H3, Lamin B1等。

10、如需進一步數據分析TotalLab Quant專業軟件讀取IOD值、條帶的Normalization處理、以及發表論文時所用條帶的處理,請另詢價

11、對條帶結果有特殊要求,請另詢價。

12、雙方簽訂合同后,收取70%首付后啟動預實驗。

13、WB特殊要求請咨詢。



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